沙門(mén)氏菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定、來(lái)源及分離純化
據(jù)世界衛(wèi)生組織介紹，沙門(mén)氏菌廣泛存在于家養(yǎng)和野生動(dòng)物中，常通過(guò)受污染的食物感染人類(lèi)。人感染后可能出現(xiàn)發(fā)熱、腹瀉、嘔吐、腹痛等癥狀，通常持續(xù)2至7天。大部分感染者無(wú)需特殊治療即可自愈，但兒童和老年人等特殊群體可能出現(xiàn)重癥甚至死亡病例。想要研究沙門(mén)氏菌，就得先了解其生長(zhǎng)特性，下面分享沙門(mén)氏菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定步驟。
沙門(mén)氏菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定：
將-80℃保存的沙門(mén)氏菌甘油凍存液，按1︰100的比例接種到5mLLB液體培養(yǎng)基中，37℃、200rpm/min條件下培養(yǎng)至菌液OD600值為0.6左右。配制兩瓶100mL無(wú)菌的LB培養(yǎng)基，按1︰100的比例將OD600值為0.6左右的種子菌液無(wú)菌接種到100mLLB培養(yǎng)基中，其中一瓶不接種，作為陰性對(duì)照組。于37℃、200rpm/min的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)的0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h取出1mL菌液，在96孔板中每孔加入200μL菌液，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，在酶標(biāo)儀中檢測(cè)OD600值，制作沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)曲線。選取沙門(mén)氏菌處在穩(wěn)定生長(zhǎng)期的初期階段，進(jìn)行沙門(mén)氏菌來(lái)源OMVs的分離純化。
沙門(mén)氏菌來(lái)源OMVs的分離純化：
按1︰100的比例，將100μL沙門(mén)氏菌甘油凍存液接種到10mL無(wú)菌LB培養(yǎng)基中，于37℃、200rpm/min條件下培養(yǎng)至菌液OD600值為0.6左右。將上述250μL沙門(mén)氏菌種子液無(wú)菌接種到含有250mL LB培養(yǎng)基的1L培養(yǎng)瓶中(接種兩瓶)，于37℃、200rpm/min的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)至穩(wěn)定生長(zhǎng)期的初期階段。收集處于穩(wěn)定生長(zhǎng)期初期階段的沙門(mén)氏菌培養(yǎng)液500mL，在4℃，15000g條件下離心20min去除細(xì)菌后取上清液，將上清液過(guò)0.45μm濾膜去除雜質(zhì)后收集上清液，將收集的上清液過(guò)0.22μm濾膜后收集上清，將上清經(jīng)100kD濾膜進(jìn)行超濾處理，去除蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)，用200μL無(wú)菌PBS溶液溶解沉淀物，得到沙門(mén)氏菌來(lái)源OMVs的濃縮液。
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