雪茄煙中霉菌培養(yǎng)基種類篩選、計數(shù)方法適用性研究（三）
2.1.3平板涂布法與平板傾注法的比較
GB法（孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基）比較結(jié)果如圖10所示，各樣品在兩種接種方式下霉菌計數(shù)結(jié)果差異均在1個數(shù)量級內(nèi)。通過獨立樣本T檢驗發(fā)現(xiàn)7個樣品（A,B,D,E,G,I,J）的平板涂布法與平板傾注法之間存在顯著差異，其中3個低,中濃度樣品（B,D,E）的平板涂布法檢測結(jié)果顯著高于平板傾注法，4個中,高濃度樣品（A,G,I,J）的平板傾注法檢測結(jié)果顯著高于平板涂布法。53.85%的樣品計數(shù)結(jié)果存在差異性，表明兩種接種方式間差異較大，對霉菌計數(shù)結(jié)果有較大影響。
YC/T法（改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）比較結(jié)果如圖11所示。4個樣品（B,C,D,E）中平板涂布法與平板傾注法之間存在顯著差異，且3個中,高濃度樣品（B,C,D）的平板涂布法檢測結(jié)果顯著高于平板傾注法。30.77%的樣品計數(shù)結(jié)果存在差異，且主要表現(xiàn)為平板涂布法檢測結(jié)果高于平板傾注法，表明兩種接種方式間差異較小，對霉菌計數(shù)結(jié)果影響不大。
Biokar法（SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基）比較結(jié)果如圖12所示，僅有3個樣品（B,C,L）的平板涂布法與平板傾注法之間存在顯著差異。23.08%的樣品計數(shù)結(jié)果呈現(xiàn)出差異性，且均表現(xiàn)為平板涂布法檢測結(jié)果高于平板傾注法，表明兩種接種方式間差異更小，對霉菌計數(shù)結(jié)果影響較小。
2.2霉菌計數(shù)方法的比較
3種霉菌計數(shù)方法及兩種接種方式綜合比較結(jié)果如表2所示。
表2 霉菌計數(shù)方法的比較Tab.2 Comparison of mould counting methods
| 類型 | GB法 | YC/T法 | Biokar法 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 平板傾注法 | 平板涂布法 | 平板傾注法 | 平板涂布法 | 平板傾注法 | 平板涂布法 | |
| 培養(yǎng)基 | 孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基 | 預(yù)制平板 | 改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 | 預(yù)制平板 | SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基 | 預(yù)制平板 |
| 前期準(zhǔn)備 | 培養(yǎng)基46 ℃±1 ℃水浴保溫 | 預(yù)制平板 | 培養(yǎng)基45 ℃±1 ℃水浴保溫 | 預(yù)制平板 | 培養(yǎng)基44~47 ℃水浴保溫 | 預(yù)制平板 |
| 操作步驟 | 繁瑣 | 便捷 | 繁瑣 | 便捷 | 繁瑣 | 便捷 |
| 培養(yǎng)方式 | 28 ℃±1 ℃恒溫培養(yǎng) | 28 ℃±1 ℃恒溫培養(yǎng) | 28 ℃±1 ℃恒溫培養(yǎng) | 28 ℃±1 ℃恒溫培養(yǎng) | 25 ℃恒溫培養(yǎng) | 25 ℃恒溫培養(yǎng) |
| 培養(yǎng)時間 | 5 d | 5 d | 2~5 d | 2~5 d | 54 h~3 d | 54 h~3 d |
| 菌落生長速率 | 較快 | 較快 | 較快 | 較快 | 較慢 | 較慢 |
| 菌落分布 | 不均勻 | 均勻 | 不均勻 | 均勻 | 不均勻 | 均勻 |
培養(yǎng)基的選擇：平板涂布法接種適用于GB法推薦的孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基和Biokar法推薦的SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基，平板傾注法接種更適用于YC/T法所推薦的改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。無論是霉菌計數(shù)結(jié)果還是霉菌生長形態(tài)，不同培養(yǎng)基的效果不同，在試驗研究過程中可以根據(jù)試驗?zāi)康倪x擇不同的培養(yǎng)基。
前期準(zhǔn)備及操作步驟：不同計數(shù)方法和不同接種方式對于前期準(zhǔn)備和操作步驟的要求不同。但各方法間對于平板傾注法接種的前期準(zhǔn)備較為相似，均為將培養(yǎng)基在接種前進行水浴保溫，且各水浴溫度要求差異不大，但操作步驟繁瑣。各方法間對于平板涂布法接種的前期準(zhǔn)備要求均為提前預(yù)制平板，操作步驟便捷。
培養(yǎng)時間：3種霉菌計數(shù)方法均為傳統(tǒng)微生物學(xué)檢測方法，由于霉菌生長的特殊性及樣品的差異性，各方法中對于培養(yǎng)時間的要求不盡相同。GB法,YC/T法和Biokar法對培養(yǎng)時間的要求分別為5 d,2~5 d和54 h~3 d，GB法與其他兩種方法相比培養(yǎng)周期較長，不利于霉菌快速計數(shù)，Biokar法可以在更短的培養(yǎng)時間內(nèi)實現(xiàn)對樣品中霉菌的計數(shù)。
菌落形態(tài)：根據(jù)圖5和圖9中霉菌生長形態(tài)的差異性，無論是培養(yǎng)基還是接種方式的不同，均會影響霉菌菌落形態(tài)的觀察，而培養(yǎng)基對霉菌形態(tài)的影響明顯大于接種方式。但無論平板涂布法還是平板傾注法接種方式，均表現(xiàn)出GB法所用孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基和YC/T法所用改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基更有利于霉菌生長形態(tài)的觀察，而Biokar法所用SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基則更有利于霉菌計數(shù)。
判讀計數(shù)：影響樣品中霉菌判讀計數(shù)的因素較多，在培養(yǎng)基和接種方式明確的條件下，菌落生長速率和菌落分布均勻度對于判讀計數(shù)有重要影響。由于霉菌生長的特殊性，菌落生長速率較快不利于霉菌計數(shù)，稍不注意便會造成菌落蔓延而無法計數(shù)。3種培養(yǎng)基進行比較，孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基和改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基菌落生長速率較快，不利于霉菌計數(shù)，而SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基菌落生長速率較慢，有利于霉菌計數(shù)。除霉菌生長速率外，菌落分布均勻性也影響霉菌的判讀計數(shù)，而接種方式對于菌落分布的影響更大。平板傾注法接種并培養(yǎng)后，菌落分布不均勻且菌落還可能生長在培養(yǎng)基內(nèi)部，而平板涂布法接種并培養(yǎng)后霉菌菌落在培養(yǎng)基表面分布均勻,更易于觀察與計數(shù)。
3結(jié)論
①3種培養(yǎng)基在同種接種方式條件下，雪茄煙中霉菌計數(shù)結(jié)果的一致性較好，其中Biokar法培養(yǎng)周期短，霉菌生長緩慢，可避免菌落快速蔓延，更利于計數(shù)，GB法和YC/T法則更適用于對霉菌菌落的形態(tài)觀察。②相同培養(yǎng)基在不同接種方式條件下，雪茄煙中霉菌計數(shù)結(jié)果存在差異。與平板傾注法相比，平板涂布法操作簡單，霉菌菌落均勻分布于培養(yǎng)基表面，適合大批量樣品檢測。
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