水中的細菌培養(yǎng)基溫度與菌落分布情況
通過對無菌室開紫外燈滅菌時間的長短進行空白營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)后細菌有無情況的比較分析，得出無菌室用紫外燈滅菌的最佳時間是30min;并通過接種時控制培養(yǎng)基溫度為40～45℃，了解菌落分布均勻，生長良好的前提。
細菌生長;接種條件;實驗
細菌廣泛分布于我們的生活環(huán)境中，是空氣和水中的微生物指標(biāo)之一?？諝庵械募毦倲?shù)是指1m3空氣中各種細菌的總數(shù)目。水中的細菌總數(shù)是指1ml水樣在普通瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃經(jīng)24h培養(yǎng)后所生長的細菌菌落總數(shù)。一般認(rèn)為每1ml水中細菌總數(shù)小于100個為極清潔的水，100～1000個為清潔水，1000～10000個為不太清潔水，10000個以上即為不清潔水。人們飲用了不清潔的水可產(chǎn)生各種疾病，如:細菌性痢疾、霍亂沙門氏菌病等。
1材料與方法
1.1實驗器材
培養(yǎng)皿(直徑90～100mm)，500ml大燒杯，100℃溫度計，500ml三角瓶，高壓蒸汽滅菌鍋，恒溫生化培養(yǎng)箱，放大鏡。
1.2培養(yǎng)基的配方
蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、氯化鈉5g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml。
2總結(jié)與討論
2.1實驗過程
培養(yǎng)基在配制時各種配方稱好后混于水中，經(jīng)過加熱熔化，熔化過程中要不斷攪拌使各成分均勻混于水中，并在加熱同時不斷補充失去的水分，以補足至原來的體積。否則培養(yǎng)基各成份混合不均勻，水分不足，培養(yǎng)基營養(yǎng)不全，不利于細菌生長。配制好的培養(yǎng)基若有沉渣或混濁，趁熱用三至四層紗布過濾，濾液最好用pH計調(diào)節(jié)pH值為7.2～7.4，過酸或過堿都不利于細菌生長，并在2h內(nèi)滅菌。滅菌的高壓鍋最好是單獨使用放于無菌室中，滅菌好的培養(yǎng)基可于高壓鍋中存放1～2h;待無菌室滅菌后，再打開高壓鍋取出備用，以達到備用培養(yǎng)基絕對無菌。
2.2無菌室的滅菌
一般要求只要打開無菌室的紫外燈20min后，無菌室就可以達到無菌，但經(jīng)過實驗驗證無法達到要求，細菌空白對照實驗如表1所示。
表1空白對照實驗
從4組細菌空白實驗可以看出無菌室達到真正無菌只要打開無菌室紫外燈30min后，再打開無菌操作臺的風(fēng)機預(yù)熱20min后進行水樣細菌接種實驗，這樣就可得到相對準(zhǔn)確的細菌總數(shù)分析結(jié)果。這一結(jié)果是紫外燈更換90d左右所得。但紫外燈使用1a以上，接近1.5a，開紫外燈30min后，再預(yù)熱無菌操作臺20min后進行空白實驗，不能達到無菌室真正無菌的要求，建議紫外燈1a更換1次。
2.3培養(yǎng)基的溫度
水樣接種時，培養(yǎng)基的溫度非常關(guān)鍵，溫度高了容易把水樣中的細菌燙死，溫度低了一方面瓊脂培養(yǎng)基容易凝固(尤其在冬季)，另一方面水樣與培養(yǎng)基混合不均勻，培養(yǎng)出的菌落分不開，成團生長，不易計數(shù)。培養(yǎng)基的溫度在40～45℃左右最佳，接種時最好用溫度計控制溫度，建議在無菌室放一個電爐，溫度達不到時，以便加熱使溫度保持在一定范圍內(nèi)，也可用熱水浴保持培養(yǎng)基的溫度。
3結(jié)論
試驗表明，要準(zhǔn)確掌握水樣中的細菌總數(shù)，關(guān)鍵是細菌的培養(yǎng)。細菌培養(yǎng)的前提不僅有配制良好且無菌培養(yǎng)基，真正無菌的接種室，而且要有接種時培養(yǎng)基適宜的溫度。
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