微生物計(jì)數(shù):從顯微鏡視野法到μCount3D微生物立體計(jì)數(shù)儀的轉(zhuǎn)換
本轉(zhuǎn)換旨在將傳統(tǒng)、手動(dòng)操作的顯微鏡視野法(如血球計(jì)數(shù)板法)微生物計(jì)數(shù),升級(jí)為使用丹麥BioSense公司μCount3D微生物立體計(jì)數(shù)儀的自動(dòng)化、高通量計(jì)數(shù)方法。核心轉(zhuǎn)變?cè)谟诶靡淮涡杂?jì)數(shù)板(如C-Chip?)和儀器的自動(dòng)數(shù)字成像分析技術(shù)替代人工鏡檢和計(jì)數(shù)。
關(guān)鍵轉(zhuǎn)換步驟與變化:
1.操作流程簡(jiǎn)化:
舊法:清潔計(jì)數(shù)板/蓋片->精確加樣/蓋片->手動(dòng)鏡檢、尋找視野->人工計(jì)數(shù)特定方格->公式計(jì)算濃度->清潔。
新法(μCount3D):混勻樣本->吸取固定體積樣本->滴加至計(jì)數(shù)板加樣口->插入儀器->啟動(dòng)自動(dòng)檢測(cè)(自動(dòng)吸入、填充、3D掃描、分析、計(jì)算)->讀取/導(dǎo)出結(jié)果->丟棄計(jì)數(shù)板。步驟顯著減少,操作更簡(jiǎn)便。
2.計(jì)數(shù)原理升級(jí):
舊法:依賴(lài)人眼在二維平面上識(shí)別和計(jì)數(shù)特定區(qū)域細(xì)胞,易受主觀(guān)性、疲勞、細(xì)胞重疊和聚焦問(wèn)題影響。
新法(μCount3D):儀器自動(dòng)進(jìn)行多焦平面快速掃描,構(gòu)建樣本的3D圖像信息,并由專(zhuān)用軟件自動(dòng)識(shí)別和計(jì)數(shù)整個(gè)計(jì)數(shù)腔內(nèi)的細(xì)胞/顆粒,準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性更高,減少人為誤差。
3.數(shù)據(jù)輸出與管理:
舊法:手動(dòng)記錄原始數(shù)據(jù),人工計(jì)算濃度,易出錯(cuò),數(shù)據(jù)管理不便。
新法(μCount3D):軟件自動(dòng)計(jì)算并顯示濃度(cells/mL)、總細(xì)胞數(shù)、活力(如適用),結(jié)果可直接屏幕查看、導(dǎo)出報(bào)告(PDF,Excel,CSV)或存儲(chǔ),便于追溯、管理和共享。
4.耗材與維護(hù):
舊法:使用可清洗的血球計(jì)數(shù)板和蓋玻片(需小心操作避免損壞或污染)。
新法(μCount3D):使用一次性計(jì)數(shù)板,無(wú)需清洗,避免交叉污染,但產(chǎn)生耗材成本。儀器本身需定期維護(hù)。
核心優(yōu)勢(shì):
高效快速:?jiǎn)未螜z測(cè)僅需數(shù)十秒至一分鐘,大幅提升通量。
準(zhǔn)確客觀(guān):3D成像和自動(dòng)分析減少人為誤差和主觀(guān)性。
操作簡(jiǎn)便:流程自動(dòng)化,降低操作者技能要求和疲勞。
數(shù)據(jù)電子化:結(jié)果自動(dòng)生成并存儲(chǔ),便于管理和追溯。
無(wú)清洗:使用一次性耗材,省去清洗步驟和污染風(fēng)險(xiǎn)。
注意事項(xiàng):
需確保樣本濃度在計(jì)數(shù)板線(xiàn)性范圍內(nèi)(通常需適當(dāng)稀釋?zhuān)?
樣本應(yīng)避免含過(guò)多碎片、氣泡或過(guò)于粘稠。
需考慮一次性計(jì)數(shù)板的耗材成本。
建議轉(zhuǎn)換初期進(jìn)行新舊方法并行測(cè)試以驗(yàn)證結(jié)果一致性。
總結(jié):轉(zhuǎn)換為μCount3D計(jì)數(shù)儀實(shí)現(xiàn)了微生物計(jì)數(shù)過(guò)程的自動(dòng)化、數(shù)字化和標(biāo)準(zhǔn)化,顯著提高了效率、準(zhǔn)確性和數(shù)據(jù)管理水平,是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室替代傳統(tǒng)顯微鏡計(jì)數(shù)法的理想選擇。
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