金黃色葡萄球菌：紅霉素、慶大霉素和氧氟沙星時(shí)間-抑菌生長(zhǎng)曲線分析（一）
抗生素是目前治療細(xì)菌感染的主要藥物，其出現(xiàn)和使用為人類健康做出了不可磨滅的貢獻(xiàn)，對(duì)動(dòng)物疾病的預(yù)防與控制作用同樣功不可沒。但不規(guī)范用藥則會(huì)引發(fā)畜禽的群體性危害，造成獸藥殘留超標(biāo)、產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性和畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全等問題。為了滿足人類對(duì)動(dòng)物性食品不斷增長(zhǎng)的需求，人們?cè)谛笄蒺B(yǎng)殖過程中常常大量使用抗生素類藥物來預(yù)防動(dòng)物性疾病并促進(jìn)生長(zhǎng)?？股氐臍埩羰沟靡恍﹦?dòng)物體內(nèi)的細(xì)菌常暴露在抗生素環(huán)境中，體內(nèi)的耐藥菌株將會(huì)得到選擇性增殖，使得抗生素的治療效果下降。
金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染，是臨床上重要的致病菌，特別是超級(jí)細(xì)菌-耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的出現(xiàn)及其耐藥性的快速增長(zhǎng)，使其成為全球內(nèi)感染的首要病原菌。金黃色葡萄球菌常引起兩類疾病：（1）化膿性疾病，主要引起動(dòng)物的乳房炎、關(guān)節(jié)炎等，可通過動(dòng)物傳遞給人類；（2）毒素性疾病，會(huì)引起人和動(dòng)物的中毒性嘔吐等，嚴(yán)重威脅人類的食品安全和公共衛(wèi)生。
微生物比濁法能直觀地反應(yīng)抗生素總的抗菌能力，因此利用該原理，本文選擇了慶大霉素、紅霉素、氧氟沙星3種不同類型的藥物，實(shí)時(shí)測(cè)定并繪制時(shí)間-吸光度抑菌生長(zhǎng)曲線，以此分析3種藥物在不同濃度下、不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)上與細(xì)菌相互作用的關(guān)系，旨在為藥效學(xué)的研究、解決細(xì)菌耐藥性及指導(dǎo)臨床合理使用抗生素提供數(shù)據(jù)和試驗(yàn)參考。
1材料與方法
1.1菌株來源
質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC29213，購(gòu)自北京蘭伯瑞生物技術(shù)有限責(zé)任公司；實(shí)驗(yàn)菌株DX1、XNC22于養(yǎng)殖場(chǎng)中分離獲得。
1.2儀器
CLASSⅡ生物安全柜，購(gòu)自美國(guó)NUAIRE公司；全自動(dòng)高壓滅菌器，購(gòu)自日本三洋電器集團(tuán)；恒溫培養(yǎng)箱，購(gòu)自德國(guó)BINDER公司；VITEK 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)，購(gòu)自BIOMERIEUX公司；WBS-100微生物比濁法測(cè)定儀，購(gòu)自北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開發(fā)公司。
1.3培養(yǎng)基與材料
抗生素檢定培養(yǎng)基3號(hào)，購(gòu)自北京中海生物科技有限公司；營(yíng)養(yǎng)瓊脂，購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；革蘭氏陽性菌鑒定卡（GP鑒定卡），購(gòu)自BIOMERIEUX公司；標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或中國(guó)食品藥品檢定研究院。
1.4方法
1.4.1菌懸液的制備
根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI，Clinical and Laboratory Standards Institute）對(duì)菌懸液濃度的要求，來稀釋菌懸液。將保存的菌種接種于配制好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后取出待用，在生物安全柜中，用棉簽取單菌落于裝有0.85%滅菌生理鹽水的安瓿瓶中，用麥?zhǔn)媳葷醿x將試驗(yàn)菌液濃度調(diào)節(jié)為0.5麥?zhǔn)希?.5麥?zhǔn)暇鷳乙旱臐舛燃s為1.5×108cfu/mL），后進(jìn)一步稀釋至5×105cfu/mL，備用。
1.4.2儲(chǔ)備藥液的制備
將慶大霉素、紅霉素、氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品分別溶解并稀釋成2048μg/mL的抗生素貯存液。配制的藥液以質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC®29213進(jìn)行質(zhì)控，其最低抑菌濃度（Minimum inhibitory concentration，MIC）值在CLSI允許的范圍內(nèi)。
1.4.3微量稀釋法-藥物敏感性試驗(yàn)
采用CLSI指定的微量稀釋法，進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)。取稀釋至5×105cfu/mL濃度的菌液0.1mL分別加入含系列抗菌藥物溶液的板中，混勻使試管中最終抗菌藥物的濃度為原稀釋濃度的50%，并設(shè)置陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。將加有菌液和抗菌藥物的板置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～20 h。觀察記錄結(jié)果，以無菌生長(zhǎng)的最低抗菌藥物溶液的濃度為MIC值。判定標(biāo)準(zhǔn)參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)，具體見表1，按判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷被檢菌株的敏感性為敏感（S），中度敏感（I）或耐藥（R）。
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