?高產(chǎn)纖維素酶枯草芽胞桿菌生長曲線、產(chǎn)蛋白酶及α-淀粉酶能力及藥物敏感性研究（二）
1.5 蛋白酶、α-淀粉酶活力的測定
采用王夢超等12的福林酚法測定蛋白酶活力，酶活定義：1 mL粗酶液，在40℃，每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸的含量為1個酶活單位。
采用DNS法10測定α-淀粉酶活力。酶活定義：1 mL液體酶，在50℃，每分鐘水解淀粉產(chǎn)生1 μg葡萄糖的還原糖量為1個酶活單位。
1.6 抑菌活性及耐酸性、耐膽鹽性測定
采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行體外抑菌試驗。取80 μL濃度1×10? CFU/mL的大腸桿菌、沙門菌和金黃色葡萄球菌涂布于LB固體培養(yǎng)基上，待完全吸收后，取滅菌的牛津杯輕置于培養(yǎng)基上。取200 μL目標(biāo)菌株的菌液加入牛津杯中。用PBS作為對照。4℃擴(kuò)散12 h后37℃培養(yǎng)16 h，測量抑菌圈直徑，取平均值。判斷標(biāo)準(zhǔn)：≤5 mm，不敏感；＞5～10 mm，低度敏感；＞10～15 mm，中度敏感；＞15～20 mm，高度敏感；＞20 mm，極度敏感。測定目標(biāo)菌株在pH值2.0、3.0、4.0和7.0條件下處理4 h后的存活率。復(fù)檢0、0.1%、0.2%和0.3%膽鹽處理8 h后目標(biāo)菌株的耐受性。
1.7 安全評估
采用紙片擴(kuò)散試驗檢測目標(biāo)菌株對青霉素、頭孢唑啉、慶大霉素、克拉霉素、林可霉素、諾氟沙星、萬古霉素、利福平的敏感性。測定抑菌區(qū)，并對被測菌株進(jìn)行藥敏評價。
將32只26～28 g的健康雌性昆明小鼠均分為低劑量、中劑量、高劑量和對照4組，分別灌胃0.2 mL濃度為10?、10?、101? CFU/mL的目標(biāo)菌株培養(yǎng)液，對照組灌胃無菌LB液體培養(yǎng)基，記錄小鼠采食和體重情況，連續(xù)灌胃14 d后處死小鼠，剖檢觀察臟器。
1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
利用SPSS 26.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05表示差異顯著。
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