廣西牛肺炎支原體病原的分離和鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)分析（下）
2.3病原生化性狀和細(xì)菌L型測(cè)定
病原細(xì)菌L型測(cè)定無(wú)其他細(xì)菌形態(tài)出現(xiàn)。生化試驗(yàn)結(jié)果表明，只能發(fā)酵乳糖，不能水解精氨酸，對(duì)葡萄糖、木糖、覃糖、七葉苷、蔗糖、尿素和甘露醇均不能分解利用。
2.4PCR鑒定
利用牛支原體特異性基因op?p D/F F1和F2引物可以從樣品中擴(kuò)增出448 bp的片段，與預(yù)期相符，而應(yīng)用牛傳染性胸膜肺炎特異性引物擴(kuò)增樣品則為陰性（圖3）。
圖3病原的PCR鑒定結(jié)果
2.5opp D/F基因序列測(cè)定與比較結(jié)果
通過(guò)對(duì)病原的opp D/F基因的序列分析表明，病原（命名為Gxmboppdf）與國(guó)內(nèi)首次分離的牛支原體HB0801及Hubei-1株同源性為99.3%（圖4）。
2.6藥敏試驗(yàn)結(jié)果
經(jīng)48 h培養(yǎng)后觀察，病原對(duì)氧氟沙星、環(huán)丙沙星、慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素、左氟沙星、恩諾沙星、林霉素、氯霉素、新霉素、強(qiáng)力霉素、諾氟少星、大觀霉素、四環(huán)素高敏；對(duì)丁胺卡那霉素中敏；對(duì)阿奇霉素、紅霉素低敏；對(duì)頭孢拉定、青霉素、頭孢曲松、利福平、頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢唑啉、氨芐西林、羅紅霉素、多粘菌素、復(fù)方新諾明耐藥。
2.7其他細(xì)菌的分離
無(wú)菌取病牛肝、腎、肺、淋巴結(jié)分別接種TSA瓊脂培養(yǎng)基和兔血營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)48 h后未見(jiàn)有菌生長(zhǎng)。
圖4廣西牛支原體同源性比較及進(jìn)化樹(shù)分析
3、討論
根據(jù)發(fā)病經(jīng)過(guò)、臨床癥狀、病理變化、病原培養(yǎng)特性、生化試驗(yàn)、PCR鑒定，確診該病為牛支原體（Mycoplasma bovis）引起的犢牛肺炎，即傳染性牛支原體肺炎。自美國(guó)人Hale（1961）首次從患乳腺炎的牛奶中分離到該病原，目前已證實(shí)牛支原體可引發(fā)牛肺炎、乳腺炎，此外，還可導(dǎo)致角膜結(jié)膜炎、耳炎、關(guān)節(jié)炎、生殖道炎癥、流產(chǎn)和不孕等多種疾病，已在世界范圍內(nèi)存在。該病在歐洲最為嚴(yán)重，每年約有25%——33%的犢牛肺炎由牛支原體引起，經(jīng)濟(jì)損失達(dá)1.44億——1.92億歐元。在美國(guó)每年由牛支原體引起的牛呼吸系統(tǒng)疾病和乳腺疾病所造成的經(jīng)濟(jì)損失也高達(dá)1.40億美元，感染率高達(dá)70%.2008年，我國(guó)部分地區(qū)肉牛暴發(fā)了以壞死性肺炎為主要特征的犢牛肺炎疫情，辛九慶、石磊、冉智光等證實(shí)該疫情是由牛支原體引起的“傳染性牛支原體肺炎”，疫情波及湖北、河南、山東、東北三省等多個(gè)省市自治區(qū)，幾乎涵蓋了中國(guó)養(yǎng)牛的主要產(chǎn)區(qū)，牛發(fā)病率高達(dá)50%——100%，病死率達(dá)10%——50%，給我國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。廣西是飼養(yǎng)水牛最多的省（區(qū)），存欄437萬(wàn)頭，奶牛存欄8.77萬(wàn)頭，最近幾年肉牛產(chǎn)業(yè)也蓬勃興起，引種和流通增多，以肺炎癥狀為主的病例時(shí)有發(fā)生，不易治療，給養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。
在臨床診斷中，牛支原體引起的臨床癥狀和病理剖檢變化與牛傳染性胸膜肺炎類似，造成診斷上的困難，因此病原分離與鑒定成為最終確診的重要依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)室在收集到牛肺臟病料時(shí)進(jìn)行了病原的分離和鑒定，結(jié)果分離到1株牛支原體。此前，廣西未見(jiàn)有牛支原體病的報(bào)道，本文首次報(bào)道了廣西從外地引進(jìn)的肉牛有該病的存在，但本病在廣西的流行情況以及對(duì)廣西養(yǎng)牛業(yè)造成危害程度有待進(jìn)一步調(diào)查。
目前尚無(wú)商品化的疫苗對(duì)牛支原體病進(jìn)行預(yù)防，臨床上宜采取綜合性的防治措施。一是加強(qiáng)對(duì)牛群的引種檢疫，不從疫區(qū)引種，引種前應(yīng)做好牛支原體病、結(jié)核、布魯菌病、泰勒蟲(chóng)病等檢測(cè)，防止引進(jìn)病牛或帶菌牛。牛群引回后應(yīng)隔離檢疫，確保牛群健康并做必要的預(yù)防接種和驅(qū)蟲(chóng)后方可混群；二是加強(qiáng)對(duì)牛群的飼養(yǎng)管理和消毒工作；三是對(duì)發(fā)病牛隔離治療，早發(fā)現(xiàn)，早診斷，早治療是有效控制本病的原則。在用藥上宜全群（和病牛接觸的牛群）用藥，療程要夠，藥量要足。藥敏試驗(yàn)的結(jié)果表明，四環(huán)素類、喹諾酮類和泰樂(lè)菌素類對(duì)牛支原體敏感，但要注意經(jīng)常變換藥物，以免耐藥性的產(chǎn)生而使治療效果不理想。
廣西牛肺炎支原體病原的分離和鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)分析（上）
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